匹多莫德影响小儿辅助T细胞亚群功能的体外研究

2018-01-09 16:39 来源:重庆医科大学附属儿童医院 
2018-01-09 16:39:10来源:重庆医科大学附属儿童医院作者:责任编辑:张梦凡

匹多莫德影响小儿辅助T细胞亚群功能的体外研究

    刘恩梅,王莉佳,罗蓉,杨锡强(重庆医科大学附属儿童医院,重庆400014)

    【摘要】

    目的:探讨匹多莫德对小儿辅助 T细胞亚群功能的影响。

    方法:常规分离新生儿脐血单个核细胞(CBMC)和毛细支气管炎患儿外周血单个核细胞(PBMC),加入匹多莫德,ELISA检测培养上清中的IL-4、IFN-γ、IL-10和IL-12水平。结果:匹多莫德可显著下调PHA诱导的CBMC IL-4分泌,上调 LPS诱导的 IL-12P40和IL-12P70的分泌;匹多莫德诱导毛细支气管炎患儿PBMC产生IFN-γ,恢复患儿体内相对亢进的Th2细胞功能,单独匹多莫德诱导毛细支气管炎患儿PBMC产生较高水平的IL-12P70(135±44pg/ml,n=9),较低水平的IL-10(52±16pg/ml,n=9)。

    结论:匹多莫德具备调节Th1/Th2细胞功能平衡的能力,其机制可能与匹多莫德作用于抗原提呈细胞,刺激IL-12产生有关。

    【关键词】匹多莫德;T细胞亚群;细胞因子

    Effects of pidotimodon help T cell subsets of children vitro

    LIU En-mei,WANG Li-jia,LUO Rong,YANG Xi-qiang(Children'Hospital,Chongqing University of Medical Sciences,Chongqing

    400014,China)

    [Abstract]

    Objective:To explore the effects of pidotimod on T cell subsets of children.Method:Neonatal cord blood mononuclear cells (CBMC)and peripheral mononuclear cells(PBMC) of children with bronchiolitis were isolated to investigate the effects of pidotimod.The level of IL-4、IFN-γ、IL-10 and IL-12 in supernatant were detected by ELISA.Results:Pidotimod significantly down-regulated IL-4 secretion of CBMC induced by PHA, and up-regulated IL-12p40 and p70 production induced by LPS.Moreover,pidotimod increased IFN-γ production from PBMC of children with bronchiolitis. Pidotimod alone could induce relatively higher IL-12p70(135±44pg/ml,n=9) and lower IL-10(52±16pg/ml,n=9) production. Conclusion:Pidotimod could regulate the balance of Th1/Th2.The mechanism of Pidotimod might regulate to its impact antigen presenting cell to induce IL-12.

    [Key words]Pidotimod;T cell subsets; Cytokine

    匹多莫德(Pidotimod,PT)是人工合成的二肽物质,由焦谷氨酸和硫代脯氨酸组成,具有广泛生物活性,是一种新型非特异性免疫调节剂[1] 。已有的临床研究表明,匹多莫德可增强反复呼吸道感染患儿的免疫功能,减少反复感染的频率[2,3]。但匹多莫德具体的作用机制和环节有待进一步研究。新生儿未分化T细胞(native T cell)有Th2细胞发育的潜能[4],3~6个月小婴儿常见的下呼吸道感染-毛细支气管炎存在 Th1/Th2 细胞功能失衡[5],寻找安全有效的促进Th1细胞发育,减少感染性疾病和过敏性疾病的方法是人们努力的方向。本研究拟通过体外观察匹多莫德对新生儿脐血单个核细胞(CBMC)和毛细支气管炎患儿单个核细胞(PBMC)分泌细胞因子的影响,探讨其对抗原提呈细胞功能、T 细胞尤其是Th1细胞功能的影响,为临床应用匹多莫德打下坚实的理论基础。

    1、对象与方法

    1.1研究对象

    收集8例足月顺产新生儿脐带血(母孕期无异常)以及2003年9月至12月在我院呼吸科9例住院毛细支气管炎患儿外周血,平均年龄3.8月,男女比 4:5,采血前均未使用激素治疗。

    1.2实验方法

    常规Ficoll分离CBMC和毛细支气管炎患儿PBMC,RPMI培养基+10%小牛血清调细胞浓度为1×106/ml,设以下实验组:

  (1)空白对照组

  (2)匹多莫德(1000μg/ml)刺激组

  (3)PHA(100μg/ml)刺激组

  (4)PHA+匹多莫德(1000μg/ml)

  (5)LPS(10μg/ml)刺激组

  (6)LPS+匹多莫德(1000μg/ml)

  分别培养48小时,收集培养上清,-20oC冰箱保存,待测。

  用ELISA(R&D)试剂盒检测培养上清中IL-4、IL-10、IL-12p70、IL12p40、IFN-γ水平。

    1.3统计方法

    使用Graphpad Instat软件中配对t检验处理数据。

    2、结果

    2.1匹多莫德对脐血单个核细胞分泌细胞因子的影响

    PHA体外刺激CBMC分泌较高水平的IL-4[(643±113)pg/ml,n=6]和极低水平的IFN-γ(结果未显示),匹多莫德下调PHA诱导IL-4产生[(385±88)pg/ml,n=6],两者比较有显著差异(t=3.145,p=0.0255)。

    进一步的研究表明匹多莫德可显著上调LPS诱导CBMC分泌IL-12p40和IL-12p70,结果见表1。

    表1 匹多莫德对LPS诱导脐带血单个核细胞IL-12p40和IL-12p70分泌的影响

    2.2匹多莫德对毛细支气管炎患儿PBMC分泌细胞因子的影响

    毛细支气管炎患儿血清中IL-4、IFN-γ浓度及IL-4/IFN-γ值见表2,结果提示毛细支气管体内存在Th2细胞功能亢进;体外匹多莫德刺激后PBMC产生的IL-4与IFN-γ分别为(15±1.3)pg/ml(n=9)和(135±94)pg/ml(n=9),IL-4/IFN-γ为(0.582±0.16)pg/ml(n=9),PHA+匹多莫德诱导PBMC产生的IL-4与IFN-γ分别为(15±1)pg/ml(n=9)和(924±92)pg/ml(n=9),提示体外加入匹多莫德可诱导IFN-γ产生,抑制患儿体内相对亢进的Th2细胞功能,见表2;进一步的研究表明,体外匹多莫德可诱导毛细支气管炎患儿PBMC产生较高水平的IL-12p70[(135±44)pg/ml,n=9],较低水平的IL-10[(52±16)pg/ml,n=9],LPS+匹多莫德共同刺激也可诱导高水平的IL-12p70[(445±303)pg/ml,n=9],较低水平的IL-10[(182±81)pg/ml,n=9],提示匹多莫德可能通过激活抗原提呈细胞,促进Th1细胞,抑制Th2细胞功能。

  表2 毛细支气管炎患儿血清及匹多莫德刺激产生T细胞细胞因子水平(pg/ml)

    3、讨论

    作为一种新型人工合成的免疫调节剂,体外和动物模型研究表明,匹多莫德既可通过激活NK细胞、单核细胞吞噬活性,中性粒细胞趋化功能,调节非特异性免疫,又可通过促进淋巴细胞增殖,恢复CD4+/CD8+细胞比率,诱导IL-2和IFN-γ分泌,调节特异性免疫功能[6-8]。临床上匹多莫德可增强反复呼吸道感染患儿的免疫功能,减少反复感染的频率[2-3]。本文在已有研究的基础上,进一步利用新生儿CBMC作为研究对象,探讨匹多莫德对Th1/Th2细胞功能的影响及其作用机制。

    结果表明与以往的研究相似,PHA可诱导新生儿CBMC分泌一定水平的IL-4和极低水平的IFN-γ,匹多莫德可下调IL-4的产生,并可显著上调LPS诱导IL-12p40和IL-12p70的产生,因此,上述结果表明匹多莫德不仅可调节T细胞的分化功能,同时可刺激抗原提呈细胞分泌IL-12p40和IL-12p70。通过体外观察匹多莫德对新生儿CBMC分泌IL-4和IL-12的研究结果,我们推测匹多莫德在调节Th细胞亚群,尤其是Th1/Th2细胞平衡上起一定作用。毛细支气管炎患儿体内存在Th1/Th2细胞功能失衡[5],如果匹多莫德能通过调节患儿失衡的Th1/Th2细胞功能,为将其应用于治疗毛细支气管炎打下基础。患儿血清的细胞因子水平检测进一步证实以前的结果,毛细支气管患儿体内存在Th2细胞功能亢进,体外单独匹多莫德和匹多莫德加PHA均刺激患儿外周血淋巴细胞产生IFN-γ,逆转患儿体内相对亢进的Th2细胞功能,进一步的研究表明,体外单独匹多莫德可诱导毛细支气管患儿PBMC较高水平的IL-12p70,提示匹多莫德可能通过诱导IL-12p70的产生,促进IFN-γ的分泌,达到促进Th1细胞发育的目的。综上所述,我们的结果表明,匹多莫德具备一定调节Th1/Th2细胞功能平衡的能力,其机制可能与匹多莫德作用于抗原提呈细胞,刺激产生IL-12水平有一定的关系。

    【参考文献】

    【相关新闻】

    专栏-药物临床循证是非谈

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